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    PCR鑒定試劑盒的DNA提取方法是如何的
  • 發布日期:2022-03-26      瀏覽次數:65
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        PCR鑒定試劑盒原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
        PCR鑒定試劑盒的DNA提取方法:
        可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業化產品,并按照相應試劑盒說明進行操作。
        1、液體培養物:取液體培養物100μL加到1.5mL無菌離心管中,8000rpm離心3min,盡量吸棄上清,加入50μLDNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進行PCR反應。
        2、固體培養物:挑取單克隆菌落與50μLDNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進行PCR反應。
        3、糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μLDNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
        4、其他液體標本:取標本2-3mL,13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μLDNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
        注:陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議在樣品制備區域加入陽性對照。 
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